Ole Svane Thestrup, der er søn af afdelingsleder Christian Svane Thestrup (død 1996) og Ella Thestrup, født Jensen, tog studentereksamen og blev derefter en fast del af det århusianske musikliv. Senere havde han en ultra-kort karriere som journalistelev i Hobro inden han læste dramaturgi på Aarhus Universitet i tre år og blev uddannet på skuespillerskolen ved Århus Teater 1973-1976. Han fortsatte på Århus Teater indtil 1980 og gjorde sig bl.a. bemærket i flere musicals. I 1980 blev han ansat på Det Kongelige Teater, hvor han han bl.a. havde roller i "Hamlet", "Don Ranudo", "Erasmus Montanus" og "Jeppe på Bjerget". Han forlod midt i 1980erne Det Kongelige Teater for at blive freelance - skuespiller. Ole Thestrup har bl.a. medvirket på Gladsaxe Teater, Folketeatret, Betty Nansen Teatret, Det Ny Teater og Det Danske Teater. Rollen i "Woyzeck" på Betty Nansen Teatret i 2000 hører til et af højdepunkterne i hans karriere. I 2006 medvirkede han i The Producers på Det Ny Teater og i 2007 spillede han rollen som Jeppe i "Jeppe på Bjerget" på Det Danske Teater. Ole Thestrup har også spillet med i utallige revyer bl.a. flere år i ØM-revyen. Han er dansk films suverænt sureste mand og har skabt sig en karriere som absurd-komisk brokkehoved i en lang række danske komedier - ikke mindst som den skydegale Alfred i "Blinkende Lygter" og derudover bl.a. i "Adams Æbler", "Solkongen", "Den Sorte Madonna" og "Frode og alle de andre rødder". På TV blev han kendt i rollen som sur ejendomsinspektør i serien "Een stor familie", men har iøvrigt medvirket i flere TV-serier. Ole Thestrup har i 2009 udgivet sine erindringer "Min lange rejse hjem". Efter to forliste ægteskaber blev han den 11. maj 1991 gift i Koed Kirke med psykoterapeut Hanne Marie Knudsen (18-11-1949)